Your Good Partner in Biology Research

ELISA試劑盒技術(shù)原理及方法對比

1971年瑞典學(xué)者Engvail和Perlmann,荷蘭學(xué)者Van Weerman和Schuurs分別報道將免疫技術(shù)發(fā)展為檢測體液中微量物質(zhì)的固相免疫測定方法,即酶聯(lián)免疫吸附測定法 (ELISA) 。


 

1. ELISA技術(shù)原理

ELISA 是將抗原抗體的特異性免疫反應與酶的催化反應相結合的免疫檢測技術(shù),利用酶標技術(shù)標記抗原或抗體,通過(guò)顯色反應,用以檢測相應的抗體或抗原,對其進(jìn)行定性或定量分析。

① 將已知的抗原或抗體通過(guò)物理吸附于固相載體表面,并保持其免疫學(xué)活性;

② 利用酶標技術(shù)使抗原或抗體與酶形成酶結合物,并保持酶標抗原或抗體的免疫活性及酶的活性;

③ 酶結合物與相應的抗原或抗體結合后,加入底物,底物被酶催化顯色,依據底物顏色反應及深淺判斷待測物中相應抗體或抗原的量。


 

2. 三種必要的試劑

在這種測定方法中有3種必要的試劑:

① 固相的抗原或抗體(免疫吸附劑)

② 酶標記的抗原或抗體(標記物)

③ 酶作用的底物(顯色劑)


 

3. ELISA四種常用的方法

ELISA可用于測定抗體,也可用于檢測抗原。根據檢測目的和操作步驟不同,有四種類(lèi)型的常用方法:間接法、雙抗體夾心法、雙抗原夾心法、競爭法。

3.1 間接法(此法是測定抗體最常用的方法)

將已知抗原吸附于固相載體,加入待檢標本(含相應抗體)與之結合。洗滌后,加入酶標抗球蛋白抗體(酶標抗抗體)和底物進(jìn)行測定。

間接法

3.2 雙抗體夾心法(此法常用于測定抗原)

將已知抗體吸附于固相載體、加入待檢標本(含相應抗原)與之結合。溫育后洗滌,加入酶標抗體和底物進(jìn)行測定。

雙抗體夾心法

3.3 雙抗原夾心法(此法多用于乙肝抗體檢測)

將已知抗原吸附于固相載體、加入待檢標本(含相應抗體)與之結合。溫育后洗滌,加入酶標抗原和底物進(jìn)行測定。

雙抗原夾心法

3.4 競爭法(此法可用于抗原和半抗原的定量測定,也可用于測定抗體)

以測定抗原為例,將持異性抗體吸附于固相載體;加入待測抗原和一定量的酶標已知抗原,使二者競爭與固相抗體結合;經(jīng)過(guò)洗滌分離,最后結合于固相的酶標抗原與待測抗原含量呈負相關(guān)。

競爭法

 

4. ELISA四種方法的比較

方法 注意點(diǎn) 優(yōu)勢 缺點(diǎn)
間接法
Indirect ELISA
關(guān)鍵是抗原的純度。也要注意正常血清中所含的高濃度的非特異性抗體這一干擾因素。 二抗可以加強信號,而且有多種選擇能做不同的測定分析。不加酶標記的一級抗體則能保留它最多的免疫反應性。 交互反應發(fā)生的機率較高。
雙抗體夾心法Sandwich ELISA 兩種抗體必須小心選取,才可避免交互反應或競爭相同的抗原結合部位。 高靈敏、高專(zhuān)一性,抗原無(wú)須事先純化。 抗原一定得擁有兩個(gè)以上的抗體結合部位。
雙抗原夾心法Sandwich ELISA 關(guān)鍵在于酶標抗原的制備。根據抗原結構的不同,尋找合適的標記方法。 受檢標本不需稀釋?zhuān)芍苯佑糜跍y定,因此其敏感度相對高于間接法。 只適用于某些項目,受抗原大小等很多因素影響。
競爭法
Competitive ELISA
這兩種抗體必須小心選取,才可避免交互反應或競爭相同的抗原結合部位。 可適用比較不純的樣本,而且數據再現性很高。 整體的敏感性和專(zhuān)一性都較差。