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DT3C,抗體內化效率評估的新工具

DT3C,抗體內化效率評估的新工具

DT3C是一種重組蛋白,由一個(gè)沒(méi)有受體結合域的白喉毒素diphtheria toxin (DT)和鏈球菌蛋白G(Streptococcus protein G)的C1、C2、C3(3C)結構域構成 ,主要用于體外檢測靶細胞對單克隆抗體的內化效率。

DT3C主要應用領(lǐng)域:

  • 抗體內化效率的體外評估
  • ADC藥物研究
  • 抗體篩選和評估
DT3C機制圖

DT3C的技術(shù)優(yōu)勢:

相比于目前常見(jiàn)的抗體內化效率檢測技術(shù)(如酸性緩沖液洗脫法、mAb-ZAP法、pHrodo技術(shù)等),DT3C重組蛋白測定抗體內化具有操作簡(jiǎn)單、精準量化的特點(diǎn),具有廣闊的應用前景。

  • 制備簡(jiǎn)單:僅需在室溫下孵育30分鐘即可形成mAb-DT3C偶聯(lián)物;
  • 多物種適用性:可與來(lái)自不同物種的任何IgG結合,形成mAb-DT3C偶聯(lián)物;
  • 快速評估:可通過(guò)MTT,WST-1,CTG等方法快速、準確地檢測mAb在細胞表面的內化效率;
  • 內化效率高:抗體內化效率明顯高于Mab-ZAP
可體外檢測ADC抗體內化效率

可體外檢測ADC抗體內化效率

抗體內化效率明顯高于Mab-ZAP

抗體內化效率明顯高于Mab-ZAP

參考文獻:M. Yamaguchi et al. Biochemical and Biophysical Research Communications 454 (2014) 600–603.

華美生物 DT3C重組蛋白:

華美生物用大腸桿菌表達系統所表達的DT3C重組蛋白,經(jīng)SDS-PAGE驗證,SEC-HPLC檢測,純度高于90%;

DT3C重組蛋白SDS-PAGE驗證
DT3C重組蛋白與CCR8抗體孵育

我們用不同濃度的DT3C蛋白與CCR8抗體37℃孵育30min后加入培養板培養48h;EC50分別為0.5795-1.400 μg/mL、0.5608-1.318 μg/mL。

CT26/Human CCR8 Stable Cell Line

CT26/Human CCR8 Stable Cell Line:5000cells/孔;
BMK-1/2:10μg/mL

如何用DT3C檢測抗體內化效率?

實(shí)驗步驟:

  • 細胞培養:準備對數培養期細胞,對細胞計數并鋪板;
  • DT3C與抗體混合液的配置:在37°C將mAb和DT3C孵育30分鐘,形成mAb-DT3C偶聯(lián)物;
  • 細胞處理:將mAb-DT3C偶聯(lián)物添加到細胞培養基中,使其與細胞相互作用;
  • 內化效率評估:使用MTT或其他方法檢測mAb在細胞表面的內化效率。