Your Good Partner in Biology Research

ELISA試劑盒選擇原則及質(zhì)控標準

目前市場(chǎng)上的 ELISA 試劑盒質(zhì)量參差不齊,試劑盒數以千計,供應商的科研實(shí)力也相差懸殊,試劑盒的質(zhì)量好壞會(huì )嚴重影響到檢測結果的準確性。因此如何去挑選適合自己的試劑盒就顯得特別重要。

以下為歸納ELISA試劑盒選擇需考慮的要素,供科研朋友們參考。


 

1. 十大選擇原則

1.1 基于研究物種選擇

如果樣品來(lái)自經(jīng)典模型,如人、小鼠和大鼠,則可以相對輕松地找到經(jīng)過(guò)驗證的ELISA試劑盒。但如果樣品來(lái)自猴子等非經(jīng)典模型,則可獲得的商品ELISA試劑盒數量有限。

如果要檢測這些物種的指標,最好要對待檢物(如有種屬差異性)進(jìn)行同源性分析以及試劑盒的種屬交叉反應數據進(jìn)行分析。


1.2 基于分析目的選擇

ELISA是一種可用于定性和定量分析的工具。定性ELISA為樣品提供簡(jiǎn)單的陽(yáng)性或陰性結果,而定量ELISA通過(guò)標準曲線(xiàn)反映樣品中分析物的濃度。您想要量化樣品中的分析物還是僅檢測樣品的存在與否?根據分析目的,您可以選擇定性ELISA或定量ELISA。


1.3 基于檢測樣本選擇

大多數商業(yè)ELISA試劑盒在血清/血漿和細胞培養上清液中得到驗證。請務(wù)必詳細閱讀產(chǎn)品說(shuō)明書(shū),以確保該產(chǎn)品與樣品兼容。此外,其他因素如溶血和樣品中脂質(zhì)的存在會(huì )干擾分析性能。因此,在選擇ELISA試劑盒之前,請考慮這些因素。建議對樣品進(jìn)行預實(shí)驗,以驗證試劑盒是否合適且對樣品是否敏感。


1.4 基于檢測范圍選擇

試劑盒的檢測范圍就是標曲范圍,特別要注意待測樣本濃度是否落在標曲范圍內,對于濃度很高的樣本,可以先進(jìn)行預實(shí)驗摸索到比較好的稀釋倍數后再大量測定樣本。

在此之前,我們可以通過(guò)NCBI的文獻,uniprot,pax-dab上給出的蛋白表達量參考值來(lái)比較ELISA試劑盒中給出的樣本值與報道值是否一致。


1.5 基于樣本量選擇

商業(yè)化試劑盒的樣品用量通常需要10μL至100μL, 如果您的樣品很珍貴或較難獲取,則需要認真考慮試劑盒對樣品用量的要求。如果樣品量少,最好選擇需要較少量樣品的ELISA試劑盒。


1.6 基于文獻引用選擇

產(chǎn)品的文獻引用特別是高質(zhì)量的 SCI 文章的引用是很多客戶(hù)都關(guān)心的問(wèn)題,這是業(yè)界對產(chǎn)品認可的一個(gè)非常重要指標,而且對相關(guān)用戶(hù)的科研有一定的借鑒作用。

CUSABIO試劑盒的客戶(hù)引用文獻,目前已達10,000余篇,并以每年數百篇的數量在增長(cháng)。

>> 查看更多


1.7 基于售前售后服務(wù)選擇

在市場(chǎng)經(jīng)濟條件下,服務(wù)理念已逐漸被企業(yè)家所重視,企業(yè)的營(yíng)銷(xiāo)環(huán)境發(fā)生了巨大的變化,高科技的廣泛應用,信息高速流動(dòng),產(chǎn)品硬件標準趨同。對客戶(hù)所能提供的技術(shù)支持服務(wù)、問(wèn)題處理的及時(shí)性、客戶(hù)的滿(mǎn)意度等也是選擇產(chǎn)品的考慮因素。


1.8 基于美譽(yù)度選擇

一個(gè)品牌不光要有知名度,更重要的是美譽(yù)度。從同行或實(shí)驗室同僚了解供應商的口碑,也通過(guò)行業(yè)調查公司以及網(wǎng)絡(luò ),相關(guān)宣傳資料等可以找到美譽(yù)度高的ELISA試劑盒供應商,在一定程度上可以反映產(chǎn)品的質(zhì)量問(wèn)題。


1.9 基于成本預算選擇

國際公認的知名品牌一般質(zhì)量可靠,文獻引用多。但國際品牌由于進(jìn)口和國際運輸等成本較高,因此售價(jià)也較高。其實(shí)優(yōu)質(zhì)國產(chǎn)品牌也是不錯的選擇,因省去不少物流和報關(guān)費用,與國外進(jìn)口試劑盒相比價(jià)格上有較大的優(yōu)惠,而且能提供比較靈活的包裝規格, 如48T小包裝,非常適合中國國情。


1.10 基于關(guān)鍵技術(shù)參數選擇

如需選取新的 ELISA 試劑盒,首先需要仔細評估檢測性能。重要參數包括靈敏度、動(dòng)態(tài)范圍以及精度,這些在多數的 ELISA 試劑盒說(shuō)明書(shū)中都有體現。對于典型樣品類(lèi)型而言,其它參數對 ELISA 性能更具預測價(jià)值。

十大選擇原則

 

2. 八大質(zhì)控標準

華美生物CUSABIO ELISA試劑盒是試劑配備完整、質(zhì)控嚴格、經(jīng)過(guò)驗證的即用型ELISA試劑盒。在研發(fā)的過(guò)程中,采取多個(gè)嚴控的步驟以保證試劑盒的卓越品質(zhì),保證提供給客戶(hù)的產(chǎn)品具有線(xiàn)性、特異性、穩定性和靈敏度等的高標準。

本小節旨在為您解讀不同參數,以幫助您的樣品找到最合適的 ELISA 試劑盒。

2.1 線(xiàn)性范圍

通過(guò)線(xiàn)性范圍,我們可以計算出實(shí)際的檢測樣本值。

以CSB-E07270h(人脂聯(lián)素(ADP)ELISA Kit)為例的標準曲線(xiàn)。

ng/ml OD1 OD2 Average Corrected
100 2.839 2.897 2.868 2.718
50 1.968 1.974 1.971 1.821
25 1.144 1.192 1.168 1.018
12.5 0.709 0.733 0.721 0.571
6.25 0.433 0.450 0.441 0.291
3.125 0.303 0.301 0.302 0.152
1.562 0.242 0.223 0.233 0.083
0 0.149 0.151 0.150  

2.2 線(xiàn)性

樣本經(jīng)梯度稀釋后檢測分析即為線(xiàn)性分析。

線(xiàn)性是試劑盒準確度和特異性的判定標準。為了評估測定的線(xiàn)性,在各種基質(zhì)中加入高濃度分析物的樣品,并用樣品稀釋劑稀釋以產(chǎn)生具有在測定的動(dòng)態(tài)范圍內的值的樣品。

以CSB-E07270h(人脂聯(lián)素(ADP)ELISA Kit)為例:

血清樣品在1:100,1:200,1:400,1:800下稀釋。

細胞培養物上清液在1:1,1:2,1:4,1:8下稀釋。

測試值在80-120%之間并顯示出良好的線(xiàn)性。

  Sample Serum(n=4)
1:100 Average( %) 91
Range ( %) 85-97
1:200 Average( %) 97
Range ( %) 91-103
1:400 Average( %) 93
Range ( %) 85-95
1:800 Average( %) 95
Range ( %) 90-100
  Sample Cell Culture Supernates(n=4)
1:1 Average( %) 97
Range ( %) 80-100
1:2 Average( %) 95
Range ( %) 91-110
1:4 Average( %) 90
Range ( %) 85-95
1:8 Average( %) 96
Range ( %) 90-100

2.3 最低檢測限

最低檢測限是靈敏度的測試指標。由使用的抗體效價(jià)等決定的,在研發(fā)過(guò)程中,一般會(huì )優(yōu)化保證高靈敏度、低背景的檢測結果從而大大提高試劑盒的靈敏度。檢測限越低,靈敏度越高。


2.4 精確度

CV (%) 或變異系數代表了測定的一致性,即同一樣本重復測定的符合程度。

一般是選取同一批次或者不同批次的試劑盒對不同濃度的樣本進(jìn)行定量檢測,需要盡量降低批次差異帶來(lái)的系統誤差,保證相同樣本結果的重復性。

應考慮兩種類(lèi)型的精度:批內精確度和批間精確度。

批內精確度:主要指一次實(shí)驗內不同孔之間的可重復性。

在一個(gè)平板上測試三個(gè)已知濃度的樣品20次,以評估CSB-E07270h(人脂聯(lián)素(ADP)ELISA Kit)的精確度:CV%<8%。

批間精確度:主要指不同實(shí)驗間結果的可重復性。

在20個(gè)測定中測試三個(gè)已知濃度的樣品以評估CSB-E07270h(人脂聯(lián)素(ADP)ELISA Kit)的精確度:CV%<10%。

  Intra-Assay Precision Inter-Assay Precision
Sample 1 2 3 1 2 3
n 20 20 20 20 20 20
Mean(ng/ml) 13.215 12.894 13.438 12.897 13.109 12.963
SD 0.63 0.37 0.53 1.10 0.81 1.00
CV(%) 4.75 2.847 3.931 8.562 6.145 7.741

2.5 特異性

特異性是ELISA試劑盒的關(guān)鍵指標。主要受到不同物種間的高同源性蛋白、靶蛋白配體或靶蛋白受體的干擾。

CUSABIO選擇具有高特異性的原料,以確保ELISA試劑盒的優(yōu)異特異性,分析交叉反應和干擾,確認只能識別和檢測目標分析物。


2.6 回收率

回收率=靶蛋白的測定濃度/添加的靶蛋白濃度*100%

它反映了樣品分析過(guò)程中分析物的損失程度,回收率越高,準確度越高。

回收實(shí)驗可檢測試劑盒是否受干擾因子的影響,以不添加蛋白的天然樣本基質(zhì)為空白對照,回收率應介于80%-120%,表明試劑盒的性能較好。

以CSB-E07270h(人脂聯(lián)素,ADP ELISA試劑盒)為例的回收率。

Sample Type Average(%) Range(%)
Serum (n=5) 95 89-98
EDTA plasma (n=4) 97 90-100

2.7 穩定性

穩定性越好,存儲時(shí)間越長(cháng)。

通常采用加速降解的方法來(lái)推斷試劑盒的有效期。通常試劑盒在37℃放置一天折合有效期2個(gè)月,實(shí)際工作中,一般將試劑盒在37℃破壞3-7天后,然后檢測上述指標,觀(guān)察是否在范圍內。也可留樣至有效期后進(jìn)行檢驗,來(lái)衡量有效期,對于批量大的指標,可將加速降解和留樣檢驗相結合的方法。

將CUSABIO ELISA試劑盒的主要原料和測定板在37℃下熱損傷測試7天,然后與在4℃下儲存的原料進(jìn)行比較。 7天后,OD值≤30%,這是合格的。


2.8 天然樣本驗證

避免使用有外源性污染的樣本,避免血樣本出現溶血、細菌污染,最好使用較新鮮樣本,避免反復凍融。

CUSABIO ELISA試劑盒可以檢測天然樣品,根據靶點(diǎn)性質(zhì)對天然樣本進(jìn)行選擇(血清,血漿、細胞上清等),為客戶(hù)提供最真實(shí)的實(shí)驗數據參考。

以CSB-E07270h(人脂聯(lián)素(ADP)ELISA Kit)為例,我們在之前以1:500稀釋度測試血清和血漿樣品,測試值為S3-S5。