ELISA試劑盒選擇原則及質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

1. 十大選擇原則

1.1 基于研究物種選擇

如果樣品來自經(jīng)典模型，如人、小鼠和大鼠，則可以相對輕松地找到經(jīng)過驗(yàn)證的ELISA試劑盒。但如果樣品來自猴子等非經(jīng)典模型，則可獲得的商品ELISA試劑盒數(shù)量有限。

如果要檢測這些物種的指標(biāo)，最好要對待檢物(如有種屬差異性)進(jìn)行同源性分析以及試劑盒的種屬交叉反應(yīng)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。

1.2 基于分析目的選擇

ELISA是一種可用于定性和定量分析的工具。定性ELISA為樣品提供簡單的陽性或陰性結(jié)果，而定量ELISA通過標(biāo)準(zhǔn)曲線反映樣品中分析物的濃度。您想要量化樣品中的分析物還是僅檢測樣品的存在與否？根據(jù)分析目的，您可以選擇定性ELISA或定量ELISA。

1.3 基于檢測樣本選擇

大多數(shù)商業(yè)ELISA試劑盒在血清/血漿和細(xì)胞培養(yǎng)上清液中得到驗(yàn)證。請務(wù)必詳細(xì)閱讀產(chǎn)品說明書，以確保該產(chǎn)品與樣品兼容。此外，其他因素如溶血和樣品中脂質(zhì)的存在會干擾分析性能。因此，在選擇ELISA試劑盒之前，請考慮這些因素。建議對樣品進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，以驗(yàn)證試劑盒是否合適且對樣品是否敏感。

1.4 基于檢測范圍選擇

試劑盒的檢測范圍就是標(biāo)曲范圍，特別要注意待測樣本濃度是否落在標(biāo)曲范圍內(nèi)，對于濃度很高的樣本，可以先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索到比較好的稀釋倍數(shù)后再大量測定樣本。

在此之前，我們可以通過NCBI的文獻(xiàn)，uniprot，pax-dab上給出的蛋白表達(dá)量參考值來比較ELISA試劑盒中給出的樣本值與報(bào)道值是否一致。

1.5 基于樣本量選擇

商業(yè)化試劑盒的樣品用量通常需要10μL至100μL, 如果您的樣品很珍貴或較難獲取，則需要認(rèn)真考慮試劑盒對樣品用量的要求。如果樣品量少，最好選擇需要較少量樣品的ELISA試劑盒。

1.6 基于文獻(xiàn)引用選擇

產(chǎn)品的文獻(xiàn)引用特別是高質(zhì)量的 SCI 文章的引用是很多客戶都關(guān)心的問題，這是業(yè)界對產(chǎn)品認(rèn)可的一個(gè)非常重要指標(biāo)，而且對相關(guān)用戶的科研有一定的借鑒作用。

CUSABIO試劑盒的客戶引用文獻(xiàn)，目前已達(dá)10,000余篇，并以每年數(shù)百篇的數(shù)量在增長。

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1.7 基于售前售后服務(wù)選擇

在市場經(jīng)濟(jì)條件下，服務(wù)理念已逐漸被企業(yè)家所重視，企業(yè)的營銷環(huán)境發(fā)生了巨大的變化，高科技的廣泛應(yīng)用，信息高速流動，產(chǎn)品硬件標(biāo)準(zhǔn)趨同。對客戶所能提供的技術(shù)支持服務(wù)、問題處理的及時(shí)性、客戶的滿意度等也是選擇產(chǎn)品的考慮因素。

1.8 基于美譽(yù)度選擇

一個(gè)品牌不光要有知名度，更重要的是美譽(yù)度。從同行或?qū)嶒?yàn)室同僚了解供應(yīng)商的口碑，也通過行業(yè)調(diào)查公司以及網(wǎng)絡(luò)，相關(guān)宣傳資料等可以找到美譽(yù)度高的ELISA試劑盒供應(yīng)商，在一定程度上可以反映產(chǎn)品的質(zhì)量問題。

1.9 基于成本預(yù)算選擇

國際公認(rèn)的知名品牌一般質(zhì)量可靠，文獻(xiàn)引用多。但國際品牌由于進(jìn)口和國際運(yùn)輸?shù)瘸杀据^高，因此售價(jià)也較高。其實(shí)優(yōu)質(zhì)國產(chǎn)品牌也是不錯(cuò)的選擇，因省去不少物流和報(bào)關(guān)費(fèi)用，與國外進(jìn)口試劑盒相比價(jià)格上有較大的優(yōu)惠，而且能提供比較靈活的包裝規(guī)格, 如48T小包裝，非常適合中國國情。

1.10 基于關(guān)鍵技術(shù)參數(shù)選擇

如需選取新的 ELISA 試劑盒，首先需要仔細(xì)評估檢測性能。重要參數(shù)包括靈敏度、動態(tài)范圍以及精度，這些在多數(shù)的 ELISA 試劑盒說明書中都有體現(xiàn)。對于典型樣品類型而言，其它參數(shù)對 ELISA 性能更具預(yù)測價(jià)值。

2. 八大質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

華美生物CUSABIO ELISA試劑盒是試劑配備完整、質(zhì)控嚴(yán)格、經(jīng)過驗(yàn)證的即用型ELISA試劑盒。在研發(fā)的過程中，采取多個(gè)嚴(yán)控的步驟以保證試劑盒的卓越品質(zhì)，保證提供給客戶的產(chǎn)品具有線性、特異性、穩(wěn)定性和靈敏度等的高標(biāo)準(zhǔn)。

本小節(jié)旨在為您解讀不同參數(shù)，以幫助您的樣品找到最合適的 ELISA 試劑盒。

2.1 線性范圍

通過線性范圍，我們可以計(jì)算出實(shí)際的檢測樣本值。

以CSB-E07270h（人脂聯(lián)素(ADP)ELISA Kit）為例的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.2 線性

樣本經(jīng)梯度稀釋后檢測分析即為線性分析。

線性是試劑盒準(zhǔn)確度和特異性的判定標(biāo)準(zhǔn)。為了評估測定的線性，在各種基質(zhì)中加入高濃度分析物的樣品，并用樣品稀釋劑稀釋以產(chǎn)生具有在測定的動態(tài)范圍內(nèi)的值的樣品。

以CSB-E07270h（人脂聯(lián)素(ADP)ELISA Kit）為例：

血清樣品在1：100,1：200,1：400,1：800下稀釋。

細(xì)胞培養(yǎng)物上清液在1：1,1：2,1：4,1：8下稀釋。

測試值在80-120％之間并顯示出良好的線性。

2.3 最低檢測限

最低檢測限是靈敏度的測試指標(biāo)。由使用的抗體效價(jià)等決定的，在研發(fā)過程中，一般會優(yōu)化保證高靈敏度、低背景的檢測結(jié)果從而大大提高試劑盒的靈敏度。檢測限越低，靈敏度越高。

2.4 精確度

CV (%) 或變異系數(shù)代表了測定的一致性，即同一樣本重復(fù)測定的符合程度。

一般是選取同一批次或者不同批次的試劑盒對不同濃度的樣本進(jìn)行定量檢測，需要盡量降低批次差異帶來的系統(tǒng)誤差，保證相同樣本結(jié)果的重復(fù)性。

應(yīng)考慮兩種類型的精度：批內(nèi)精確度和批間精確度。

批內(nèi)精確度：主要指一次實(shí)驗(yàn)內(nèi)不同孔之間的可重復(fù)性。

在一個(gè)平板上測試三個(gè)已知濃度的樣品20次，以評估CSB-E07270h（人脂聯(lián)素(ADP)ELISA Kit）的精確度：CV％<8％。

批間精確度：主要指不同實(shí)驗(yàn)間結(jié)果的可重復(fù)性。

在20個(gè)測定中測試三個(gè)已知濃度的樣品以評估CSB-E07270h（人脂聯(lián)素(ADP)ELISA Kit）的精確度：CV％<10％。

2.5 特異性

特異性是ELISA試劑盒的關(guān)鍵指標(biāo)。主要受到不同物種間的高同源性蛋白、靶蛋白配體或靶蛋白受體的干擾。

CUSABIO選擇具有高特異性的原料，以確保ELISA試劑盒的優(yōu)異特異性，分析交叉反應(yīng)和干擾，確認(rèn)只能識別和檢測目標(biāo)分析物。

2.6 回收率

回收率=靶蛋白的測定濃度/添加的靶蛋白濃度*100%

它反映了樣品分析過程中分析物的損失程度，回收率越高，準(zhǔn)確度越高。

回收實(shí)驗(yàn)可檢測試劑盒是否受干擾因子的影響，以不添加蛋白的天然樣本基質(zhì)為空白對照，回收率應(yīng)介于80%-120%，表明試劑盒的性能較好。

以CSB-E07270h（人脂聯(lián)素，ADP ELISA試劑盒）為例的回收率。

Sample Type	Average(%)	Range(%)
Serum (n=5)	95	89-98
EDTA plasma (n=4)	97	90-100

2.7 穩(wěn)定性

穩(wěn)定性越好，存儲時(shí)間越長。

通常采用加速降解的方法來推斷試劑盒的有效期。通常試劑盒在37℃放置一天折合有效期2個(gè)月，實(shí)際工作中，一般將試劑盒在37℃破壞3-7天后，然后檢測上述指標(biāo)，觀察是否在范圍內(nèi)。也可留樣至有效期后進(jìn)行檢驗(yàn)，來衡量有效期，對于批量大的指標(biāo)，可將加速降解和留樣檢驗(yàn)相結(jié)合的方法。

將CUSABIO ELISA試劑盒的主要原料和測定板在37℃下熱損傷測試7天，然后與在4℃下儲存的原料進(jìn)行比較。 7天后，OD值≤30％，這是合格的。

2.8 天然樣本驗(yàn)證

避免使用有外源性污染的樣本，避免血樣本出現(xiàn)溶血、細(xì)菌污染，最好使用較新鮮樣本，避免反復(fù)凍融。

CUSABIO ELISA試劑盒可以檢測天然樣品，根據(jù)靶點(diǎn)性質(zhì)對天然樣本進(jìn)行選擇（血清，血漿、細(xì)胞上清等），為客戶提供最真實(shí)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)參考。

以CSB-E07270h（人脂聯(lián)素(ADP)ELISA Kit）為例，我們在之前以1：500稀釋度測試血清和血漿樣品，測試值為S3-S5。