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預實(shí)驗設置

1、酶聯(lián)免疫吸附分析(Enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)是基于抗原和抗體的免疫反應和酶的高效催化反應而建立的一種生物分析技術(shù),可用于對待測樣本中目的蛋白進(jìn)行定性、定量分析。常見(jiàn)的待測樣本為血清、血漿。

2、對于一個(gè)完整的 ELISA kits,內包含所有試劑,其相應的實(shí)驗操作直接參考說(shuō)明書(shū)即可。對于第一次接觸 ELISA實(shí)驗而言,預實(shí)驗是一個(gè)不錯的選擇;而對于待測樣本而言,預實(shí)驗可以實(shí)現樣本的初步判斷,比如樣本是否需要稀釋等。

3、那么如何做好預實(shí)驗呢?

3.1 首先需按說(shuō)明書(shū)制備好樣本;若說(shuō)明書(shū)沒(méi)提及,則需查找相應的樣本處理方法;

3.2 所有用到的試劑要按說(shuō)明書(shū)要求配制或準備,預實(shí)驗一般設置2條帶(16孔),操作步驟請參考說(shuō)明書(shū),酶標板具體設置如下:

 

CSB-E04505m Mouse Brain derived neurotrophic facor, BDNF ELISA Kit 為例,標準品OD值如下:

待測樣本為腦組織K1、M1(為隨機編號),選擇不同的稀釋倍數做預實(shí)驗,其相應的OD如下:

通過(guò)標準品的OD及濃度值,運用Curve  Expert 1.4 軟件,繪制標準曲線(xiàn),如下:

(具體繪制過(guò)程請參考http://www.cstxtech.com/technical_con_3275.html)

將不同稀釋倍數的樣本OD代入公式,即可得到相應的待測樣本的濃度。(對于有稀釋倍數的,需要乘以相應的稀釋倍數)。

選擇使待測樣本濃度處于曲線(xiàn)陡峭處,針對CSB-E04505m檢測腦組織,可考慮原液檢測。

4、預實(shí)驗確定樣本合適的稀釋倍數,下面進(jìn)行正式實(shí)驗,排版如下,注意做好標識,正式實(shí)驗操作步驟請參考相應的說(shuō)明書(shū)。

(注意:競爭法的稍有不同,需嚴格按照說(shuō)明書(shū)操作)