Your Good Partner in Biology Research

問(wèn)題 原因 解決方案
邊緣效應 組織邊緣貼附不牢,邊緣組織松脫漂浮于液體中 APES/多聚賴(lài)氨酸處理玻片;組織切片盡量??;盡量避免選用壞死較多的組織
試劑未充分覆蓋組織 滴加試劑時(shí)讓試劑完全覆蓋組織
非特異性染色 抗體質(zhì)量問(wèn)題 使用質(zhì)量有保證的抗體
抗體孵育時(shí)間長(cháng) 減少孵育時(shí)間
抗體濃度過(guò)高 降低抗體濃度
一抗為多抗 使用單克隆抗體
內源性過(guò)氧化物酶及生物素 延長(cháng)滅活時(shí)間
封閉不足 延長(cháng)封閉時(shí)間
DAB孵育時(shí)間過(guò)久或濃度過(guò)高 按說(shuō)明書(shū)配置試劑,鏡下控制反應時(shí)間
抗體孵育后洗滌不充分 每次孵育之后洗3*5次
滴加試劑時(shí)干片 及時(shí)滴加試劑
切片在緩沖液中浸泡過(guò)久 抗原修復之后及時(shí)封閉加一抗,不能過(guò)夜
陰性結果 抗體濃度及質(zhì)量 選擇有質(zhì)量保證的抗體,先做預實(shí)驗摸索抗體使用濃度
抗原修復不全 摸索合適的抗原修復方式及修復時(shí)間
抗原豐度 正常陰性
封閉時(shí)間過(guò)長(cháng) 減少封閉時(shí)間
DAB孵育時(shí)間短 鏡下控制顯色時(shí)間
細胞通透不全,抗體未能進(jìn)入細胞反應 選擇合適的通透劑及其反應時(shí)間
一抗二抗不匹配 選擇正確來(lái)源的二抗
脫片 玻片未處理好 玻片清洗干凈后用APES或多聚賴(lài)氨酸處理
切片厚薄不均勻 更換刀片;調整好切片機狀態(tài)
烤片時(shí)間或溫度不夠 60攝食度2小時(shí)
組織自身問(wèn)題 腫瘤壞死組織及骨組織本身易脫片
抗原修復時(shí)溫度迅速變化 抗原修復后讓其自然冷卻
操作時(shí)用力過(guò)猛 有脫片嫌疑的切片不要用力甩,用吸水紙吸干殘余液體
染色弱 抗體濃度低,孵育時(shí)間短 提高抗體濃度,延長(cháng)反應時(shí)間
試劑使用超過(guò)有效期 試劑定時(shí)更新
滴加試劑時(shí)殘余緩沖液過(guò)多使試劑稀釋 滴加試劑前盡量減少殘余液體
封閉過(guò)度 減少封閉時(shí)間
著(zhù)色不均勻 切片厚度不一致 更換刀片;調整好切片機狀態(tài)
試劑配制未混勻使局部濃度不一致 試劑充分混勻后滴加
試劑未完全覆蓋組織 滴加試劑時(shí)讓試劑完全覆蓋組織
脫蠟不完全 更換脫蠟劑或延長(cháng)脫蠟時(shí)間