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桿狀病毒-昆蟲(chóng)細胞表達與純化服務(wù)

桿狀病毒-昆蟲(chóng)細胞表達系統(BEVS)屬于真核表達系統的一種,該表達系統具有較高的安全性,并且基因組比較大,可以插入較大的外源基因,在大分子量的蛋白表達方面具有很大優(yōu)勢。并且具有完備的翻譯后加工修飾和高效表達外源基因的能力。該系統由轉移載體、桿狀病毒載體和宿主細胞組成。該系統采用一個(gè)或多個(gè)桿狀病毒的超強啟動(dòng)子,將外源目的基因插入到啟動(dòng)子后,獲得重組病毒,這種重組病毒在昆蟲(chóng)細胞復制的同時(shí),使外源基因得到高效表達。BEVS被廣泛應用于病毒疫苗開(kāi)發(fā)(如流感病毒和HPV疫苗開(kāi)發(fā))、信號蛋白制備、細胞因子制備、激酶開(kāi)發(fā)等方面。

系統優(yōu)勢

  • 基因容量大,可攜帶較大的基因片段,表達大分子量蛋白有優(yōu)勢;
  • 安全性高,桿狀病毒具有嚴格的種屬特異性;
  • 表達效率高,在被感染的晚期細胞中,蛋白可進(jìn)行高效地表達;
  • 表達產(chǎn)物的翻譯后修飾,尤其糖基化修飾與哺乳動(dòng)物細胞類(lèi)似,表達產(chǎn)物具有生物活性的可能性較高;
  • 桿狀病毒較易擴增,可以大規模生產(chǎn)重組蛋白。

服務(wù)優(yōu)勢

  • 華美生物獨有的表達體系,可實(shí)現bacmid低成本、大體積懸浮轉染,且滴度高,可用于感染放大制備蛋白,較經(jīng)典流程周期可縮短1-2周;
  • 高性?xún)r(jià)比,價(jià)格低至6500元起;
  • 貨期短:最短35工作日即可交付;
  • 產(chǎn)量高,最高可達100mg/L。

我們承諾

無(wú)風(fēng)險定制,不成功不收費

注:該無(wú)風(fēng)險定制蛋白服務(wù)僅適用于800個(gè)氨基酸以?xún)鹊牡鞍踪|(zhì)。如果您需要表達超過(guò)800個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì),我們將按步驟收費。

服務(wù)內容

步驟 服務(wù)項目 服務(wù)說(shuō)明 華美生物特色 周期
1 質(zhì)粒構建
密碼子優(yōu)化全基因合成 多載體優(yōu)化
為了提高表達成功率以及獲得更高表達量,進(jìn)行多信號肽優(yōu)化,在確保純度的同時(shí)更大程度保證了蛋白的活性。
5-10工作日
PCR擴增產(chǎn)物通過(guò)酶切連接到pFastbac1等載體上
轉化TOP10宿主
獲得測序正確的重組質(zhì)粒
2 重組Bacmid及高滴度病毒制備
轉化DH10Bac構建重組Bacmid,PCR鑒定,提取Bacmid。 懸浮轉染
懸浮轉染方式大大提高了蛋白表達量,有效縮短實(shí)驗周期
12-15工作日
重組Bacmid轉染昆蟲(chóng)細胞,得到P0代病毒,電泳檢測表達量,如有需要再將P0代病毒感染細胞得到P1-P2代病毒
3 擴大表達與純化
P1或p2代病毒感染昆蟲(chóng)細胞 優(yōu)化表達
經(jīng)過(guò)優(yōu)化后,通過(guò)一步轉染培養最快5天內即可得到大量的目的蛋白,低代數的病毒毒液感染細胞即可得到大量目的蛋白
5-10工作日
通過(guò)親和、離子交換、疏水及分子篩等多種層析方法純化目的蛋白
4 其他(可選)服務(wù)
收費 酶切去除標簽服務(wù) 靈活的附加服務(wù)
提供多種附加服務(wù),客戶(hù)可根據實(shí)驗需求靈活選擇
3個(gè)工作日
免費 可提供無(wú)菌操作、內毒素去除和凍干等服務(wù)(備注:凍干與無(wú)菌操作不可同時(shí)滿(mǎn)足) 2個(gè)工作日
5 質(zhì)控
進(jìn)行純度、濃度等檢查,并提供QC報告 報告詳細
為每個(gè)項目提供產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)及完善的質(zhì)控報告
3-5工作日
總時(shí)間 25-40工作日

特色表達體系

● pFastbac1-KHM載體+sf9細胞高效表達

  • 無(wú)縫克隆連接不懼任何內切酶位點(diǎn);
  • N端含有10xHis較常規6xHis在IMAC中具有更強結合能力,同時(shí)含有凝血酶位點(diǎn),可通過(guò)酶切去除標簽得到無(wú)標簽蛋白;
  • C端含有MYC-tag可應用于標簽抗體WB檢測,較His-tag具有更強靈敏度;
  • Amp抗性篩選。

案例展示

案例1:昆蟲(chóng)桿狀病毒表達系統高效表達蛋白

采用桿狀病毒-昆蟲(chóng)細胞表達系統,該蛋白得到高效表達,細胞裂解液經(jīng)過(guò)SDS-PAGE檢測即可看到明顯條帶,經(jīng)過(guò)純化后檢測,該蛋白表達量高達20mg/L。

蛋白純化圖

泳道1:上樣后的穿透液
泳道2:細胞裂解液
泳道3:Marker
泳道4:30 mM咪唑洗脫液
泳道5:60 mM咪唑洗脫液
泳道6:250 mM咪唑洗脫液


案例2:昆蟲(chóng)桿狀病毒表達系統表達大分子量蛋白

該項目目的蛋白較大,客戶(hù)選擇基因合成,載體構建,bacmid構建及后期的蛋白表達純化均在我公司完成,最后該蛋白成功在sf9細胞中表達,表達量達到5mg/L,純度達到95%,客戶(hù)收到該蛋白經(jīng)過(guò)驗證后,對我們的產(chǎn)品質(zhì)量非常滿(mǎn)意。

蛋白純化圖

泳道1:60 mM咪唑洗脫


案例3:昆蟲(chóng)桿狀病毒表達系統表達小分子量蛋白

該蛋白分子量比較小,表達難度較高,采用我公司的pFastBac1-MBP載體進(jìn)行融合表達后,融合蛋白成功表達,后經(jīng)過(guò)酶切和二次純化后,目的蛋白純度達到95%。

蛋白純化圖

泳道1:融合蛋白酶切前
泳道2:融合蛋白酶切后
泳道3:二次純化后

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