ELISA常見(jiàn)問(wèn)題及解答
Q: 什么是ELISA？ELISA的常見(jiàn)步驟是什么？
ELISA是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的縮寫(xiě)，用于檢測(cè)特定蛋白質(zhì)的存在并確定其濃度。ELISA包括三種類(lèi)型：“夾心法”（sandwich ELISA）、競(jìng)爭(zhēng)法（competitive ELISA）和間接法（indirect ELISA）。常見(jiàn)的步驟包括儲(chǔ)存、試劑準(zhǔn)備、ELISA板處理、樣本或試劑加入、孵育、洗滌和讀取。請(qǐng)參考我們的說(shuō)明書(shū)以獲取詳細(xì)信息。
Q: CUSABIO的ELISA試劑盒適用于哪種物種？能否在說(shuō)明書(shū)未提及的物種中使用你們的ELISA試劑盒？
不同的ELISA試劑盒適用于不同的物種，包括人類(lèi)、大鼠、馬、兔、小鼠、綿羊、豬、牛、狗、雞、魚(yú)、猴子、植物等。請(qǐng)參考每個(gè)試劑盒的說(shuō)明書(shū)以了解適用的物種。對(duì)于不同的物種，抗體的特異性和基質(zhì)干擾也會(huì)有所不同。如果您在尋找適用于您所需物種的試劑盒方面遇到困難，可點(diǎn)擊右側(cè)在線聯(lián)系客服，我們可以為您推薦合適的試劑盒。
Q: CUSABIO的ELISA試劑盒進(jìn)行了哪些質(zhì)量控制和性能評(píng)估？
CUSABIO的ELISA試劑盒都在嚴(yán)格的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)下對(duì)下述指標(biāo)進(jìn)行了仔細(xì)評(píng)估，包括：線性范圍、線性、檢測(cè)下限、精密度、回收率、穩(wěn)定性、特異性和天然樣品檢測(cè)等，以確保良好的性能。點(diǎn)擊此處了解更多關(guān)于質(zhì)量控制的信息。
Q: CUSABIO的ELISA試劑盒中是否包含標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌罚?/p>
我們?cè)诙ㄐ訣LISA試劑盒中提供陽(yáng)性和陰性對(duì)照品，而在定量ELISA試劑盒中，我們提供可以作為質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)品。試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)品和整個(gè)試劑體系是相匹配的。通過(guò)實(shí)驗(yàn)，客戶可以繪制出良好的標(biāo)準(zhǔn)曲線，證明包括標(biāo)準(zhǔn)品在內(nèi)的整個(gè)系統(tǒng)運(yùn)行良好，因此標(biāo)準(zhǔn)品可以發(fā)揮質(zhì)量控制的作用。建議對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行復(fù)孔。
Q: 每次測(cè)試中需要做多少次ELISA標(biāo)準(zhǔn)品和樣本？
建議每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣本都做復(fù)孔。
Q: 可以混合使用兩種不同ELISA試劑盒的試劑嗎？是否能只購(gòu)買(mǎi)試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)品/抗體？
不可以，不同批次號(hào)的ELISA試劑盒中的試劑不能混合使用，而且我們不單獨(dú)銷(xiāo)售試劑盒中的組分。希望您能理解。
Q: CUSABIO的試劑盒中是否添加了BSA和防腐劑？你們的終止溶液是什么？
ELISA試劑盒中的某些組分含有BSA。我們?cè)诖蠖鄶?shù)ELISA試劑盒中使用商業(yè)Proclin 300作為防腐劑，2N硫酸作為終止溶液。
Q: 可以在室溫下進(jìn)行孵育嗎？
除了食品安全和藥物殘留ELISA試劑盒外，所有ELISA試劑盒的孵育溫度均為37℃，因?yàn)檫@是抗原和抗體結(jié)合的最佳溫度。我們不建議在室溫下進(jìn)行孵育，因?yàn)槭覝夭环€(wěn)定。
Q: TMB是什么？為什么在使用TMB系統(tǒng)測(cè)試樣本時(shí)應(yīng)該使用雙光譜？
TMB（3,3',5,5'－四甲基聯(lián)苯胺）是ELISA中使用的顯色底物。TMB可以作為氫供體，通過(guò)過(guò)氧化酶（如辣根過(guò)氧化酶）催化過(guò)氧化氫的還原反應(yīng)，將其轉(zhuǎn)化為水。加入終止溶液后，反應(yīng)停止，孔中發(fā)展的顏色從藍(lán)色變?yōu)辄S色。吸光度值應(yīng)該在450 nm波長(zhǎng)下測(cè)量。我們建議使用雙光譜測(cè)試樣本，以避免底部的干擾和劃痕導(dǎo)致的誤差。
Q: 當(dāng)加入終止溶液后，為什么整個(gè)板孔中會(huì)出現(xiàn)黃色或淺黃色？
可能存在的原因有：
a. 添加的試劑不正確。您應(yīng)該檢查試劑的成分和批號(hào)，確保使用的是試劑盒中正確的試劑。
b. 洗板不充分。您應(yīng)該確保在每個(gè)洗滌步驟中，所有孔中的緩沖液體積相同。在最后一次洗滌后，用紙巾強(qiáng)力吸干板上的殘留緩沖液。
c. 移液管頭或顯色試劑容器受到酶偶聯(lián)物的污染，或空白孔受到陽(yáng)性對(duì)照物的污染。您應(yīng)該在試劑之間更換移液管頭，并為每個(gè)試劑使用單獨(dú)的儲(chǔ)液池。操作過(guò)程中使用移液器。
d. 底物暴露在光線下或在使用前受到污染。在準(zhǔn)備投入孔中之前，應(yīng)將底物放置在黑暗中保存。
e. 檢測(cè)抗體或親和素-HRP的濃度過(guò)高。您應(yīng)該檢查計(jì)算或進(jìn)一步稀釋后再次嘗試。
f. 孵育時(shí)間或顯色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。您應(yīng)嚴(yán)格按照試劑盒的方案進(jìn)行操作。
g. 在讀取時(shí)使用了錯(cuò)誤的波長(zhǎng)。波長(zhǎng)應(yīng)為450nm，對(duì)于TMB還應(yīng)進(jìn)行650nm波長(zhǎng)校正。
Q: 當(dāng)顯色完成后，為什么整個(gè)板孔中包括陽(yáng)性對(duì)照的孔中沒(méi)有發(fā)展出任何顏色？
可能存在的原因有：
a. 使用了錯(cuò)誤的試劑。在準(zhǔn)備或使用時(shí)，請(qǐng)仔細(xì)檢查標(biāo)簽。
b. 在洗滌或樣品加入步驟中，由于酶偶聯(lián)物的污染，導(dǎo)致顯色試劑失活。您應(yīng)確保酶偶聯(lián)物容器中沒(méi)有酶抑制劑。檢查并確保洗滌緩沖液容器干凈。
c. 錯(cuò)誤地使用了某個(gè)試劑或步驟。您應(yīng)仔細(xì)閱讀試劑盒的方案，并嚴(yán)格遵循每個(gè)步驟。
Q: 為什么標(biāo)準(zhǔn)品和樣本的孔中出現(xiàn)了弱顏色？
可能存在的原因有：
a. 試劑過(guò)期或儲(chǔ)存不當(dāng)。您應(yīng)按照試劑盒的方案進(jìn)行良好的儲(chǔ)存，并在過(guò)期日期之前使用。避免污染。
b. 使用前，試劑和樣本未達(dá)到室溫。您應(yīng)將所有試劑和樣本放置在室溫下30分鐘。
c. 移液吸液不足，吐液速度過(guò)快，吸液管壁上液體過(guò)多或吸液管壁不潔凈。您應(yīng)使用校準(zhǔn)過(guò)的移液器，確保移液管頭與其完全匹配，并緩慢移液。建議一次性使用。
d. 孵育時(shí)間不足。您應(yīng)準(zhǔn)確設(shè)置計(jì)時(shí)器。
e. 顯色時(shí)間不足。您應(yīng)在15—30分鐘內(nèi)進(jìn)行顯色。通常情況下，20分鐘是最佳時(shí)間，除非另有指示。
f. 顯色試劑添加順序錯(cuò)誤。您應(yīng)嚴(yán)格按照試劑盒的方案進(jìn)行操作。
g. 過(guò)多的洗滌或濃縮洗滌緩沖液稀釋不當(dāng)。您應(yīng)減少洗滌的沖擊力：稀釋濃縮洗滌緩沖液，控制洗滌時(shí)間，并根據(jù)手冊(cè)記錄洗滌次數(shù)和劑量。
h. 水質(zhì)不合格。當(dāng)準(zhǔn)備洗滌緩沖液完成后，請(qǐng)檢查并確保其pH為中性。
i. 在洗滌或樣品加入步驟中，由于酶偶聯(lián)物的污染，導(dǎo)致顯色試劑失活。您應(yīng)確保酶偶聯(lián)物容器中沒(méi)有酶抑制劑。檢查并確保洗滌緩沖液容器干凈。確保純凈水沒(méi)有污染。
Q: 為什么標(biāo)準(zhǔn)曲線看起來(lái)正常，但是樣本的孔中出現(xiàn)了弱顏色？
可能存在的原因有：
a. 樣本中的NaN3防腐劑抑制了酶的反應(yīng)。您應(yīng)避免在樣本中使用此防腐劑。
b. 在檢測(cè)的樣本中沒(méi)有強(qiáng)陽(yáng)性樣本，結(jié)果是正常的。如果您有任何疑問(wèn)，應(yīng)重復(fù)試驗(yàn)。
Q: 為什么以肉眼看結(jié)果正常但讀數(shù)較低？
在讀數(shù)時(shí)使用了錯(cuò)誤的濾光片。波長(zhǎng)應(yīng)為450nm，并使用650nm波長(zhǎng)校正TMB。
Q: 為什么重復(fù)性差？
可能存在的原因有：
a. 試劑盒儲(chǔ)存不當(dāng)或儲(chǔ)存環(huán)境差。您應(yīng)按照數(shù)據(jù)表上的建議儲(chǔ)存所有組分，而不是在室溫下過(guò)長(zhǎng)時(shí)間。
b. 標(biāo)準(zhǔn)的制備不正確。您應(yīng)根據(jù)試劑盒的方案，使用推薦的稀釋劑嚴(yán)格重構(gòu)標(biāo)準(zhǔn)。在使用前的10分鐘內(nèi)準(zhǔn)備好試劑，并迅速加入孔中。
c. 添加樣本后混勻不充分。當(dāng)同時(shí)添加多個(gè)試劑時(shí)，您應(yīng)在渦旋混合器中充分混合試劑。在持有試劑時(shí)要小心，避免濺出。
d. 孔讀數(shù)重復(fù)性差。您應(yīng)校準(zhǔn)酶標(biāo)儀。
e. 孵育時(shí)間、洗滌條件、顯色條件和操作者不一致。您應(yīng)重復(fù)標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)。確保反應(yīng)條件和操作者一致。
f. 洗滌不當(dāng)。您應(yīng)使用移液管加入200μL的洗滌緩沖液，或者用移液管充分填滿每個(gè)孔，但不允許溢出。檢查酶標(biāo)板洗滌器的所有孔口，確保充分的洗滌。
g. 溫度不均勻。您應(yīng)在孵育期間保持恒定溫度，避免溫度波動(dòng)。
h. 加樣本時(shí)壁面殘留過(guò)多或移液管尖端劃傷孔底。您應(yīng)緩慢、小心地將移液管尖端沿孔壁降低，避免觸碰孔底。
i. 重復(fù)使用材料。您應(yīng)在樣本之間更換移液管尖端，在試劑之間更換儲(chǔ)液器。
j. 偶爾在截?cái)嘀蹈浇霈F(xiàn)的陽(yáng)性和陰性值。您應(yīng)對(duì)同一樣本設(shè)置3個(gè)重復(fù)測(cè)量，并在2個(gè)樣本中獲得相同的結(jié)果。
k. 加樣本時(shí)的交叉污染。您應(yīng)在添加樣本時(shí)避免交叉污染。
Q：為什么出現(xiàn)異常顏色？
可能存在的原因有：
a. 手動(dòng)洗滌時(shí)發(fā)生交叉污染。您應(yīng)在手動(dòng)洗滌時(shí)，在填充洗滌緩沖液3次后立即將孔中液體清除，并在下一次設(shè)定浸泡時(shí)間以減少交叉污染。
b. 敲擊酶標(biāo)板時(shí)發(fā)生交叉污染。您應(yīng)在敲擊酶標(biāo)板時(shí)使用適當(dāng)?shù)募埥?。不要將無(wú)關(guān)材料帶入酶標(biāo)板中。不要在同一位置敲擊以避免交叉污染。
c. 樣本長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存導(dǎo)致污染。您應(yīng)保持樣本新鮮，或在低溫下儲(chǔ)存以避免污染。
d. 由于孔洗滌器堵塞而導(dǎo)致填充不足或殘留過(guò)多引起的異常發(fā)展顏色。您應(yīng)使用移液管充分填滿每個(gè)孔，但不允許溢出。檢查酶標(biāo)板洗滌器的所有孔口，確保充分的洗滌。
e. 樣本離心不完全導(dǎo)致凝固物或沉淀物的凝結(jié)或干擾。您應(yīng)完成血清和血漿的離心。
f. 洗滌緩沖液的準(zhǔn)備錯(cuò)誤或濃縮洗滌緩沖液的錯(cuò)誤使用。您應(yīng)按照手冊(cè)的要求準(zhǔn)備洗滌緩沖液。
Q: 孔板是否預(yù)涂層？如果無(wú)法一次性使用完剩余的孔或孔板，應(yīng)該如何儲(chǔ)存？
是的，酶標(biāo)板是預(yù)包被的。建議將需要進(jìn)行試驗(yàn)的孔單獨(dú)拆出，并將其余的部分在2-8℃的暗處存儲(chǔ)，避免細(xì)菌污染。
