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哺乳動(dòng)物細胞表達與純化

原核表達系統具有表達水平高、操作簡(jiǎn)單、周期短、易于大規模高密度培養、成本低等優(yōu)點(diǎn),而對于全長(cháng)抗體和糖蛋白類(lèi)生物藥物來(lái)說(shuō),表達產(chǎn)物多肽鏈的折疊、二硫鍵的形成、糖基化的有無(wú)以及糖基化的類(lèi)型常常影響表達產(chǎn)物的合成分泌、生物活性、體內穩定性以及免疫原性等特性。

與其它真核細胞表達系統相比,目的基因在哺乳動(dòng)物細胞中表達的蛋白與天然蛋白的結構、糖基化類(lèi)型和方式幾乎相同且能正確組裝成多亞基蛋白。

系統優(yōu)勢

  • 無(wú)自產(chǎn)內毒素;
  • 可以分泌表達;
  • 具有復雜的N型糖基化和準確的O型糖基化等多種翻譯后加工功能;
  • 在分子結構、理化性質(zhì)和生物學(xué)功能等方面,哺乳動(dòng)物細胞表達的蛋白最接近于天然蛋白。

服務(wù)優(yōu)勢

  • 高性?xún)r(jià)比,價(jià)格低至至8600元起;
  • 貨期短:最短35工作日即可交付;
  • 產(chǎn)量高,最高可達100mg/L。

我們承諾

無(wú)風(fēng)險定制,不成功不收費

注:該無(wú)風(fēng)險定制蛋白服務(wù)僅適用于800個(gè)氨基酸以?xún)鹊牡鞍踪|(zhì)。如果您需要表達超過(guò)800個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì),我們將按步驟收費。

服務(wù)內容

步驟 服務(wù)項目 服務(wù)說(shuō)明 華美生物特色 周期
1 質(zhì)粒構建
密碼子優(yōu)化全基因合成 多載體優(yōu)化
為了提高的表達成功率以及獲得更高表達量,除常規N端融合表達蛋白外,我們還提供C端融合標簽,在確保純度的同時(shí)更大程度保證了蛋白的活性。
5-10工作日
PCR擴增產(chǎn)物酶切連接到pSec系列、pCMV系列、pCDNA等系列載體上
轉化TOP10宿主
獲得測序正確的重組質(zhì)粒
2 小試表達
轉染級重組質(zhì)粒大量制備 轉染條件優(yōu)化
設置不同的轉染條件,根據檢測結果,選擇最優(yōu)的實(shí)驗條件。
9-11工作日
小體積瞬轉HEK293、CHO 等細胞
檢測表達產(chǎn)物
3 擴大表達與純化
擴大培養細胞并轉染 多條件表達方案
根據小試表達中蛋白定位情況及最佳實(shí)驗條件,針對性選擇不同的細胞系進(jìn)行懸浮或者貼壁擴大轉染,大大提高蛋白表達量。
8-9工作日
通過(guò)親和、離子交換、疏水及分子篩等多種層析方法純化目的蛋白
4 其他(可選)
通過(guò)酶切去除標簽 靈活的附加服務(wù)(可選)
提供多種附加服務(wù),客戶(hù)可根據實(shí)驗需求靈活選擇
3個(gè)工作日
所有蛋白都可以提供無(wú)菌
操作和內毒素去除服務(wù)
2個(gè)工作日
5 質(zhì)控
進(jìn)行純度、濃度等檢查,并提供QC報告 詳細的質(zhì)控報告
為每個(gè)項目提供產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)及完善的質(zhì)控報告
3-5工作日
總時(shí)間 25-35工作日

特色技術(shù)平臺

病毒樣顆粒 (VLPs) 技術(shù)平臺

VLPs是由多個(gè)病毒的一種或者多種衣殼蛋白自動(dòng)組裝形成的納米級別的微小顆粒。VLPs顆粒不含病毒核酸,不能進(jìn)行自主復制,安全性高,具有與病毒顆粒類(lèi)似的整體結構。

華美生物搭建了基于HEK293表達系統的包膜VLPs技術(shù)平臺,所制備的包膜VLPs在其固有的囊泡膜上顯示正確折疊的多次跨膜蛋白,展示完整的生物活性。

特色表達體系

● pSecTag2A-JT載體+HEK293細胞高效表達

  • 攜帶有CMV強啟動(dòng)子,含有IgK信號肽可高效分泌表達;
  • N端含有10xHis較常規6xHis在IMAC中具有更強結合能力,同時(shí)含有凝血酶位點(diǎn)可去除標簽得到無(wú)標簽蛋白;
  • C端含有MYC-tag可應用于標簽WB檢測,較His-tag具有更強靈敏度;
  • Amp抗性篩選。

案例展示

案例1:哺乳動(dòng)物表達系統高表達目的蛋白

眾所周知,哺乳動(dòng)物細胞表達量比較低,該蛋白經(jīng)過(guò)我公司的哺乳動(dòng)物表達系統優(yōu)化表達后,將培養基上清進(jìn)行SDS-PAGE檢測即可觀(guān)察到目的條帶,純化后經(jīng)檢測,蛋白表達量高達10mg/L。該蛋白理論分子量大小為42kDa,跑膠顯示有糖基化修飾,后經(jīng)LC-MS/MS進(jìn)一步檢驗得到確認。

蛋白純化圖

泳道1:穿透液
泳道2:培養基原液
泳道3:Marker
泳道4:20 mM咪唑洗脫液
泳道5:60 mM咪唑洗脫液


案例2:哺乳動(dòng)物表達系統高表達全長(cháng)抗體

三種全長(cháng)抗體采用我公司的載體轉染HEK293/CHO細胞后,經(jīng)SDS-PAGE檢測,可以在培養基上清中看到明顯的條帶,兼顧周期及產(chǎn)量,瞬轉表達產(chǎn)量可達100mg/L 。

蛋白純化圖

泳道1:抗體1培養基原液
泳道2:抗體1穿透液
泳道3:抗體1洗脫液
泳道4:抗體2培養基原液
泳道5:抗體2穿透液
泳道6:Marker
泳道7:抗體2洗脫液
泳道8:抗體3培養基原液
泳道9:抗體3穿透液
泳道10:抗體3洗脫液

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